Bioq. Carolina Cecilia PedevillaBioq. María Eugenia Tonelotto

Hospital de Infecciosas “F. J.

Muñiz” Residencia Bioquímica y Microbiología

Criptococosis en Criptococosis en pacientespacientes

HIVHIV

CriptococcusCriptococcusneoformansneoformans

18951895

18961896

19161916

SanfeliceSanfeliceJugo DuraznoJugo Durazno

Busse BuschkeBusse Buschke1º Caso humano1º Caso humano

TorulopsisTorulopsis

193519351935

SaccharomycesSaccharomycesSaccharomycesneoformansneoformans

TorulaTorulahystoliticahystoliticaTorulaTorulahystoliticahystolitica SaccharomycesSaccharomyceshominishominis

SaccharomycesSaccharomyceshominishominis

2. Historia:

Introducción

CriptococcusCriptococcusneoformansneoformans

1950

19291929

Epidemiología

1ºReporte

193519351935

ReservoriosReservorios

ArgentinaArgentina

2. Historia:

Introducción

3. Justificación

Micosis sistémica oportunista + frecuente 6-13% pacientes infectados Pandemia del SIDA:

Incidencia ↑40 a 50 veces

TARGA

Muñiz (casos/año)

1985:2-31991: 80

2002, 130-150 nuevos

casos/año

15% HIV+ internadosCausa de muerte

↓incidencia

Introducción

4. Etiología: Género Cryptococcus: 37 especies. Patógenos: C. neoformans

C. laurentii C. albidus

Serotipos: A / B / C /

D /

A-Dvar grubiivar gatti

var gattivar neoformans

Introducción

5. Ecología y Epidemiología:Tabla n° 1: Variedades: Principales rasgos diferencialesCaracterística

s var neoformans

var grubii var gatti

Distribución Geográfica

Cosmopolita Áreas tropicales y subtropicales

Reservorios Deyecciones y nidos de palomas

Eucaliptus

Huésped Inmunosuprimidos

Inmunocompetentes

Introducción

5. Ecología y Epidemiología:Tabla n° 1: Variedades: Principales rasgos diferencialesCaracterística

s var neoformans

var grubii var gatti

Distribución Geográfica

Cosmopolita Áreas tropicales y subtropicales

Reservorios Deyecciones y nidos de palomas

Eucaliptus

Huésped Inmunosuprimidos

Inmunocompetentes

20%

Introducción

5. Ecología y Epidemiología:Tabla n° 1: Variedades: Principales rasgos diferencialesCaracterística

s var neoformans

var grubii var gatti

Distribución Geográfica

Cosmopolita Áreas tropicales y subtropicales

Reservorios Deyecciones y nidos de palomas

Eucaliptus

Huésped Inmunosuprimidos

Inmunocompetentes

var neorformans

Introducción

Introducción 5. Ecología y Epidemiología: Transmisión: vía inhalatoria Prevalencia:

Países desarrollados EEUU: 7-10% Europa: 3-5%

Países subdesarrollados Africa: 15-30% Argentina: 10-12%

1)Neumocistosis2)CMV3)Complejo MAI4)Criptococosis

TBC=Criptococosis

6. Factores de virulencia:

Cápsula: (-) fagocitosis

Compuestos Fenólicos

(DOPAMINA)

Fenoloxidasa

(-) Estallido Respiratorio

Melanina

Introducción

Introducción

7. Formas clínicas: CEREBRO

PULMÓN

IC: autolimitada asintomática

pulmón

IS:sintomáticadiseminada

SNC

MO

Riñón

Próstata

PIEL

PortaciónAsintomática

CriptococosisCutánea Primaria

Lesión Ulcerada en HIV+

Introducción8. Tratamiento Inicial: Anfo B (0.8 mg/kg/día)

Vía endovenosa↑Permeabilidad Nefrotoxicidad

Profilaxis, de por vida: Fluco (200mg/día)

Vía oral ó endovenosa (-) síntesis ergosterol Interacción con Rifampicina (TBC)

Estudios de laboratorio

Muestras clínicas:* LCR

* Hemocultivo (HMC)* Suero* Otras: Secreciones bronquiales

PAMO Biopsias

Escarificaciones de piel

Orina

Estudios de laboratorio

LCR

Físico-químico y Citológico

Estudios de laboratorio

CriptococosisCaracterísticas

Normales

Aspecto Límpido Límpido

Color Incoloro Incoloro

Proteínas N / Lig.↑ 10-40 mg/dl

Glucosa N / Lig. ↓ 40-50 mg/dl

Rto celularPleocitosis variable

0-5 células/mm³

Rto diferencial

Pred. mononuclear

Li: 95-100 %Mo: 0-3 % N:0-3%

Cél. End.: 0-3%

SIDA0-50 cel/mm3

HIV(-)20-200 cel/mm3

Estudios de laboratorio

Análisis micológicos

1- Examen directo 2- Cultivos

3- Identificación bioquímica 4- Determinación de Variedades 5- Detección Ag capsular 6- Pruebas de sensibilidad 7- Interpretación de resultados

Estudios de laboratorio

1- Examen directo Tinta china

Otras tinciones

Gomori, Alcian Blue, HyE, etc

Falsos (+) Falsos (-)

RhodotorulaCandida

Criptoccoccus spLeucocitos

Variantes de Criptococos

25-50%HIV(-)

75%HIV(+)

Sensibilidad

Estudios de laboratorio

Análisis micológicos

1- Examen directo 2- Cultivos

3- Identificación bioquímica 4- Determinación de Variedades 5- Detección Ag capsular 6- Pruebas de sensibilidad 7- Interpretación de resultados

Estudios de laboratorio

2- Cultivos:

Agar miel Sabouraud

Agar Infusión cerebro y corazón (BHI)

Agar estría

Agar semilla de girasol

Otros: AS, ACh

A. Sabouraud

Agar Estría

Agar GirasolBHI

Estudios de laboratorio

2-Cultivos:

Toda Mx

Sabouraud

BHI / Estría

28°C

37°C

28°CGirasolHMC

Lectura 21 díasLCR/día

HMC/2semResto/1sem

Estudios de laboratorio

Análisis micológicos

1- Examen directo 2- Cultivos

3- Identificación bioquímica 4- Determinación de Variedades 5- Detección Ag capsular 6- Pruebas de sensibilidad 7- Interpretación de resultados

Estudios de laboratorio

3-Identificación bioquímica:

No fermentación de azúcares Asimilación de azúcares Producción de Ureasa

Producción de Fenoloxidasa Desarrollo a 28ºC y a 37ºC

Cryptococcus spp

Cryptococcus neoformans

Estudios de laboratorio

Análisis micológicos

1- Examen directo 2- Cultivos

3- Identificación bioquímica 4- Determinación de Variedades 5- Detección Ag capsular 6- Pruebas de sensibilidad 7- Interpretación de resultados

Estudios de laboratorio

4-Determinación de Variedades:

Medio Salkin

Medio CBG

Asimilación de D-Pro y D-Trp

* Salkin:

Clicloheximida

Glicina

Rojo fenol

* CGB:

Canavanina

Glicina

Azul de Bromotimol

* Control Negativo

Estudios de laboratorio

Análisis micológicos

1- Examen directo 2- Cultivos

3- Identificación bioquímica 4- Determinación de Variedades 5- Detección Ag capsular 6- Pruebas de sensibilidad 7- Interpretación de resultados

5-Detección Ag capsular (Suero/LCR/Orina)

Técnicas:

Aglutinación de partículas (AP)

ELISAFalsos (+) Falsos (-)

T. beigeliiFRNeoplasiasSepticemias

Prozona

Estudios de laboratorio

Estudios de laboratorio

Análisis micológicos

1- Examen directo 2- Cultivos

3- Identificación bioquímica 4- Determinación de Variedades 5- Detección Ag capsular 6- Pruebas de sensibilidad 7- Interpretación de resultados

Estudios de laboratorio

6-Pruebas de sensibilidad

METODO DE REFERENCIA: (DOCUMENTO M27-A/CLSI)

CIM Microdilución en placas

CIM FALLO TERAPEUTICO

Estudios de laboratorio

Análisis micológicos

1- Examen directo 2- Cultivos

3- Identificación bioquímica 4- Determinación de Variedades 5- Detección Ag capsular 6- Pruebas de sensibilidad 7- Interpretación de resultados

7. Interpretación de los estudios

Examen

Directoy/o

Cultivo Positiv

os

MuestrasSignificativas Potencialment

e Significativas

LCRSANGREBIOPSIAORINA

SECRECIONESRESPIRATORIAS

Estudios de laboratorio

7. Interpretación de los estudios

Ag capsular en Suero / LCR:

≥1/10 en suero → Significativo

> título → > nº Microorganismos

Valor predictivo → Tto

Estudios de laboratorio

17%

83%

Mujeres Hombres

Gráfico n°1: Criptococosis en el Hospital Muñiz: Distribución por Sexo (n=607)

Métodos de diagnóstico de la criptococosis asociada al SIDA. Dra.

Alicia Arechavala

29 años

SerotipoA

Discusión

Criptococosis: Complicación Tardía

Patologías asociadas 1. TBC2. Candidiasis3. Neumocistosis4. Infección por Herpes5. Diarrea6. Hepatitis7. Otras afecciones

Bajos CD4+

Discusión

Discusión

Muestras%

Positividad

Suero 95

LCR 93

Orina 79

Detección del Ag (AP) porcentaje de positividad

Discusión

Muestras Método % Positividad

LCRT. China 75Cultivos 91

SangreHemocultiv

o67

OrinaT. China 13Cultivo 22

Muestras y métodos: Porcentaje de Positividad

DiscusiónRelación entre Ag en suero y HMC

Título Ag HMC(+) HMC(-) Total

10000 89 18 1075000 38 13 511000 46 17 63100 33 40 7310 5 14 191 6 15 21

Negativo 7 7 14Total 224 124 348

DiscusiónRelación entre Ag en LCR y

cultivo del LCRTítulo Ag Cultivo

(+) Cultivo (-) Total

10000 34 - 345000 33 - 331000 86 5 91100 148 3 15110 39 5 451 53 2 55

Negativo 11 18 29Total 404 33 438

Discusión

Muestras%

Positividad

Suero 95

LCR 93

Orina 79

Detección del Ag (AP) porcentaje de positividad

Discusión

Muestras Método % Positividad

LCRT. China 75

Cultivos 91

Sangre Hemocultivo 67

OrinaT. China 13

Cultivo 22

Muestras y métodos: Porcentaje de Positividad

Discusión Seguimiento del tratamiento:

Títulos de Ag capsular en LCR Suero

Cultivo Éxito terapéutico:

Remisión cuadro clínico + 2 cultivos consecutivos LCR (-)

Criptococosis en pacientes HIV: Resumen

Infección generalizada

Diagnóstico de Certeza

Estudio micológico de LCRHemocultivo

Evaluación del Tratamiento

Pronóstico: Títulos de Ag capsularÉxito: Negativización de Cultivos

Agradecimientos especiales:

Dra Alicia Arechavala, Bioquímica (Unidad de Micología Hospital Muñiz) por el material ofrecido.

Bioq. Norberto Gomez, Jefe Laboratorio Central por permitirnos que

usurpáramos su oficina una y otra vez con el mismo tema!

Al laboratorio Central por estar presente cada uno aportando lo mejor para nosotras!

A los chicos: por TODO y TODOS los momentos que compartimos! GRACIAS!