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Fragoso Ortega ArielPeña Ángeles David Fernando
Gpo.: 05 Equipo: 212/10/2010
Práctica 6 Técnicas de aislamiento de microorganismos.
Objetivos Explicar el fundamento de diferentes medios de cultivo y condiciones de incubación
para el aislamiento de microorganismos con características específicas. Aplicar diferentes técnicas para el aislamiento de microorganismos. Comparar con cepas de referencia la eficiencia de las técnicas de siembra, medios de
cultivo y condiciones de incubación empleadas para el aislamiento de microorganismos
Obtener y comprobar la pureza de los cultivos aislados Aplicar una técnica de conservación de corto o mediano plazo a los cultivos puros
obtenidos.
IntroducciónEn todos los ambientes naturales habitan múltiples microorganismos de diversos tipos y actividad fisiológica. Para efectuar el estudio de un organismo particular es necesario separarlo de la población mixta en la que se encuentra. Para tal fin se emplean técnicas de aislamiento que conduzcan a la obtención de un cultivo puro.
De manera general los métodos de aislamiento incluyen:1. Separación física de los microorganismos mediante:
a) Diluciones seriadas y siembra por vertido en placab) Siembra por agotamiento
2. Utilización de medios de cultivo selectivo y diferencial.3. Aprovechamiento de características particulares de los microorganismos, tales
como la formación de esporas, el metabolismo anaerobio y/ o facultativo, la capacidad para utilizar sustratos poco comunes, etc.
Para facilitar el proceso de aislamiento y obtener mejores resultados, frecuentemente se emplean combinaciones de las técnicas anteriores.
Cuadro 1. Condiciones de incubación para el desarrollo de microorganismos
Medio
Temperatura° C
Tiempo
BHI
37 24 hEMBMSA
YPMD28 3 a 5 díasSRB
Brewer
Resultados y discusión
1
Cuadro 2. Número y tipo de colonias desarrolladas en placas sembradas por diferentes técnicas
Técnica de siembra Placa vertida AgotamientoMedios de cultivo
Número aproximado de colonias
Número de colonias
diferentes
Presencia de colonias
aisladas
Número de colonias
diferentesYPMD ND ND ND ND
SRB 80
8 eran colonias de
hongo (2 especies) y aprox. 72 de colonias de
estafilococos
ND ND
ND = No determinado
YPMD – Vertido YPMD – Agotamiento SRB – Vertido
2
Cuadro 3Resultados del crecimiento de actinomicetos y hongos
MEDIO DE CULTIVO
COLONIA MORFOLOGÍA COLONIAL CARACTERÍSTICAS MICROSCÓPICAS (INCLUIR
ESQUEMA)
YPMD
1
Se observaron cocos Gram (+) en agrupación de
estafilococos,
2
SRB1
Solo se observaron microconidias, con coloración
verdosa.
1
2
3
Cuadro 4Características de colonias seleccionadas para el aislamiento y de las colonias obtenidas en resiembras subsecuentes
Medio de
cultivo
Clave de la colonia
Características macroscópicas
Características microscópicas
(incluir esquema)
Características iniciales
1
Se observo una mezcla de 2 especies, una parecía Rhizopus y la otra se
desconoce, pero era muy similar a Penicillium.
1ª resiembra
SRB1
Solo se observaron microconidias, con coloración
verdosa.
2ª resiembra
SRB
1
En ambas colonias se observaron conidias con coloración. También se observaba el inicio de la
formación del esporangio, tomando una forma similar a
un cono (muy parecido a Rhizopus).
2
1
2
4
3ª resiembra
SRB1 Se logró observar el cuerpo
fructífero completo. Las hifas eran cenocíticas y se encontraban nucleadas.
También se observaron conidias. Además se
observaron estructuras similares a raíces.
Análisis de Resultados.
Después de inocular la caja de petri con YPMD y fijar una preparación obtenida de esta para aplicarle una tinción de gram, observamos que se trataban de cocos gram (+). Y en la caja de petri con SRB se observo el crecimiento de dos especies de hongos, una de las cuales era muy parecida a Rhizopus y al realizar la impronta se observaron solo conidias. En la primera resiembra, se eligió aislar la especie que se parecía al Rhizopus la cual presentaba un micelio blanco, sin embargo no se obtuvo completamente aislada ya que se aprecio contaminación. Aunque al observar una de las colonias formadas por impronta se seguían observando conidias con pigmentación verde. En la segunda resiembra, se observo la formación de dos colonias iguales con micelio blanco, esta vez sin contaminación. Al elaborar la impronta de una de las colonias y mirarla al microscopio vimos que se empezaban a formar esporangios que estaban tomando la forma de conos similar al Rhizopus. En la tercera resiembra se obtuvo una colonia en la cual después de realizar la impronta se observaron esporangios ovalados, hifas nucleadas y cenocíticas, conidias y algunas estructuras similares a raíces. Al comparar las características tanto macroscópicas como microscópicas de cada una de las resiembras y de la colonia seleccionada del cultivo inicial, confirmamos que se aisló con éxito la colonia del hongo seleccionado.
Conclusiones.
El medio de cultivo SRB resulto ser muy eficaz para el desarrollo de hongos y por ende su aislamiento. Este resultado confirmo la información encontrada en la investigación previa respecto al agar SRB. La pureza de una colonia aislada se determina comparando las
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resiembras entre si y las características iniciales de la colonia seleccionada para el aislamiento. La comparación se puede realizar a simple vista (observación macroscópica, el desarrollo de un solo tipo de especie) y usando la técnica de impronta, para comprobar que efectivamente las características microscópicas coinciden con las de la especie que se pretende aislar.
Bibliografía.
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Vullo, D., M. Wachsman, L. Alche. 2000. Microbiología en Práctica. Manual de laboratorio para la enseñanza de Microbiología básica y aplicada. 1ª edición. Atlante S. R. L. Argentina
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