405543

633

488UV

405

LASERS FUENTES

UNIDAD DE BARRIDO

Abajo : 405/488/543Arriba : 633/488/543

Llave Vertical(dos posiciones, una para cada set de lásers)

X

X

No tocar!! (Se desalinean los lásers).

Laser Laser

Llave de filtros -adentro: se interpone el filtroafuera: no se filtra

Llave de filtros

Canal 2 Canal 1

560-600 >660

430 - 460>510

Llave de Espejo

Dicroico>570 < 570

Laser 488

Llavevertical

Objetivo

Plano del preparado

Laser 405 (UV)

Laser 633

Abajo

Arriba

Llave de Espejo DicroicoTres posiciones, para seleccionar con cuál canal se va a detectar la emisión:

- Adentro: Canal 1- Afuera: Canal 2- Intermedia: Ambos (< 570 va a Canal 1 y >570 va a Canal 2).

Llaves de filtrosPara filtrar la luz emitida según el espectro del fluoróforo.Dos posiciones: adentro: se interpone el filtro

afuera: no se filtraLos filtros instalados son:Canal 1: 430-460 (por ej DAPI) Canal 2 :560-600 (por ej. TRICT)

>510 (por ej. FICT) >660 (por ej. Cy5)

Llave VerticalDos posiciones, una para seleccionar con qué set de

lásers se va excitar la muestra:Abajo : 405 – 488 – 543Arriba : 633 – 488 – 543

En suma:

NOTAR QUE: Si está acostumbrado a chequear con el software la configuración, tenga en cuenta que para FICT y afines le va a seguir indicando los filtros 510 y 530, aunque ahora sólo usaremos el 510

Hay 10 combinaciones posibles

Las 7 combinaciones básicas y3 más

Las 7 básicas se pueden combinar en simultaneo con luz transmitida

Llavevertical

Filtro Rojo(560-600)

Opción 1:Quiero ver una marcación Con texas red o similar (rojo)

Láser 543 prendido

Llave vertical irrelevante

Shutter abierto (software)

Registro en canal 2 (Llave Espejo Dicroico Afuera)

Filtro Rojo activo

objetivo

Plano del preparado

Canal 2

>570

Llave de Espejo Dicroico: Afuera

560-600

Laser 488

objetivo

Plano del preparado

Opción 2:Quiero ver una marcación Con FITC o similar (verde/amarillo)

Laser 488 prendido

Llave vertical irrelevante

Shutter abierto (software)

Registro en canal 1 (Llave Espejo Dicroico Adentro)

Filtro Verde Activo

Canal 1

>510

< 570

Llave de Espejo Dicroico: Adentro

Opción 3:Quiero ver azul (i.e. DAPI)

Laser UV prendido

Llave vertical abajo

Shutter abierto (software)

Registro en canal 1 (Llave Espejo Dicroico Adentro)

Filtros azulactivo

Laser uv

Llavevertical

objetivo

Plano del preparado

Canal 1

< 570

Llave de Espejo Dicroico: Adentro

430 - 460

Opción 4:Quiero ver Rojo lejano

Laser 633 prendido

Llave vertical para arriba

Shutters abierto (software)

Registro en canal 2 (Llave Espejo Dicroico Afuera)

Filtro rojo lejano activo

Plano del preparado

Laser 633

Llavevertical

objetivo

Filtro Rojo(> 660)

Canal 2

>570

633

Llave de Espejo Dicroico: Afuera

>660

Laser 633

Llavevertical

Opción 5:Quiero ver doble marcadoFITC y Rojo lejano

Laser 633 prendidoLaser 488 prendido

Llave vertical para arriba

Shutters abiertos (software)

Registro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia)

Filtros rojo lejano y verde activos

objetivo

Plano del preparado

Canal 2 Canal 1Llave de Espejo

Dicroico: Intermedia>570 < 570

>510

>660

560-600

>510

Laser 488

objetivo

Plano del preparado

Opción 6 (menos especifica que la anterior):Quiero ver doble marcadoCon texas red o similar (rojo)Y con FITC o similar (verde amarillo)

Laser 488 prendidoLaser 543 prendido

Llave vertical irrelevante

Shutters abiertos (software)

Registro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia)

Filtros Rojo y Verde activos

Canal 2 Canal 1Llave de Espejo

Dicroico: Intermedia>570 < 570

Laser UV

Llavevertical

Opción 7 :Quiero ver texas red y fluorescente azul (i.e. DAPI)Decir los problemas

Laser UV (405) prendidoLaser 543 prendidoLlave vertical para abajoShutters abiertos (software)

Registro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia)

Filtros azul y rojo activos

objetivo

Plano del preparado

Canal 2 Canal 1Llave de Espejo

Dicroico: Intermedia>570 < 570

560-600

430 - 460

Tres opciones mas

Dos de triple marcado

y una de cuádruple marcado

Opción 8 (para triple marcado):Quiero ver FITC, Rojo lejano y AZULLáser 633, 488 y UV (405) prendidos

Primera pasadaShutters 633 y 488 abiertos (software)Filtros rojo y verde activosLlave vertical para arribaRegistro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia)

Segunda pasadaLlave vertical para abajoShutters UV (405) abierto (software)Registro en canal 1 (Llave Espejo Dicroico Adentro)Filtro Azul activo

Laser 633

Llavevertical

objetivo

Laser UV

Llavevertical

objetivo

Plano del preparado

>510

>660

430 - 460

Canal 2 Canal 1

>570 < 570

2 fluorocromos y luz transmitida

Opción 9 (poco probable porque TxR y Rojo lejano cerca):Quiero ver texas red, rojo lejano y azul (i.e. DAPI)Laser UV (405), 543 y 633 prendidosPrimera pasadaLlave vertical para abajoShutters UV, 543 abiertos (software)Registro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros azul y rojo activos

Segunda pasada Llave vertical para arribaShutter 633 abiertoRegistro en canal 2:(Llave Espejo Dicroico Afuera)Filtro rojo activo

Laser UV

Llavevertical

objetivo

Laser 633

Llavevertical

objetivo

Plano del preparado

560-600

430 - 460

>660

Canal 2 Canal 1>570 < 570

Laser 633

objetivo

Llavevertical

Opción 10: Ud es exigente y quiere ver todoTodos los Lasers prendidosPrimera pasada Shutters 546 y UV abiertosLlave vertical para abajoRegistro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia)Filtros Rojo y UV activos

Segunda pasada Shutters 633 y 488 abiertosLlave vertical para arribaRegistro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia)Filtros rojo lejano y verde activos o si Ud prefiere al revés puede ser también

Laser UV

Llavevertical

objetivo

Plano del preparado

Canal 2 Canal 1>570 < 570

Sequential scan con canales virtuales3 o 4 fluorocromos y luz transmitida

NOTAR que el programa no acepta ingresar más de dos fluorocromos, el tercero se

especifíca después (cuando se agrega el canal virtual)

6

Si tiene cualquier duda o piensa que necesita algún cambio de configuración CONSULTE a la COMISIÓN.No haga cambios sin avisar al resto!! Así evitaremos pérdida de tiempo y hasta de preparados de todos.

Por cualquier consulta a la hora de usar el microscopio me peden encontrar de lunes a jueves de 13 a 17hs y los viernes de 9 a 13 hs en el interno 123 del IIBCE. Mi mail es marce_d@yahoo.com

Marcela Díaz

Investigadora contratada Grado 1 del servicio de microscopia confocal

IIBCE